摘要：丹參水溶性有效成分多具有酚酸性結(jié)構(gòu),丹參素(化學(xué)名為β?3,4?二羥苯乳酸,β?3,4?dihydroxybenyl lacticacid)是各種丹酚酸的基本化學(xué)結(jié)構(gòu):丹酚酸A是一分子丹參素與兩分子咖啡酸縮合而成;丹酚酸B為三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成;丹酚酸C 則為二分子丹參素縮合而成;其他丹酚酸亦有類似結(jié)構(gòu)。丹參水溶性成分中的迷迭香酸(ros?marinic acid A,Ros)也是由一分子丹參素和一分子咖啡酸縮合而成。此外,還有四甲基丹酚酸(tetramethyl salvianolic acid A,Sal M)等等[1]。

　　目前, 工業(yè)上提取丹參有效成分主要以熱回流法為主,而酚酸類性質(zhì)不穩(wěn)定、易氧化水解,因而提取工藝的研究應(yīng)多指標(biāo)綜合考慮。選擇不穩(wěn)定成分作為提取工藝篩選的指標(biāo)性成分,有利于篩選出合理的工藝條件,防止成分在提取工藝中損失過大[2-3]。本研究以提取物得率和丹酚酸B含量為指標(biāo),進行丹酚酸提取工藝研究, 以確定最佳的提取工藝,探索適合工業(yè)化提取的工藝條件。

　　關(guān)鍵詞：現(xiàn)代診斷與治療期刊征稿,期刊投稿,丹酚酸,提取工藝

　　1 儀器與試劑

　　1.1 儀器

　　FA1004N型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司),JZ8002天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司),RE5298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),LXJ?II型離心沉淀機(上海醫(yī)用分析儀器廠),YL?015型實驗型噴霧干燥機(上海雅程儀器設(shè)備有限公司),QT?330型柱溫箱(QM,旗美),LC?10ATVP型泵(日本島津),SPD?10AVP型紫外檢測器(日本島津),高效液相色譜柱(Diamonsil 鉆石),電子天平(SHIMADZU AY120),KQ?100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),pHS?25型pH計(上海智光儀器儀表有限公司)。

　　1.2 試藥與試劑

　　丹參藥材系唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖(購自廣州市天河寶潤堂中藥飲片廠),經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)高英主任藥師檢驗,符合《中國藥典》2005版一部丹參項下規(guī)定。乙醇(分析純,天津市富宇精細(xì)化工有限公司),甲醇、乙腈(色譜純,迪馬科技有限公司),甲酸(分析純,廣州化學(xué)試劑廠),D101大孔吸附樹脂(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所),鹽酸(分析純,廣州市白云區(qū)良田光明化工廠), FeCl3(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠),丹酚酸B對照品(批號:200504,中國藥品生物制品檢定所)。

　　2 方 法

　　2.1 丹酚酸提取工藝

　　2.1.1 實驗設(shè)計 采用均勻設(shè)計法,選擇影響醇提的3個主要因素:乙醇濃度(A)、提取時間(B)、提取溫度(C)為考察指標(biāo),乙醇濃度選擇9個水平,提取時間及提取溫度各選擇3水平、各水平循環(huán)3次,采用U9(96)表安排試驗,見表1。表1 因素水平表

　　2.1.2 樣品溶液的制備 取丹參藥材100 g,加入3 000 mL的圓底燒瓶中,按表1實驗列號各條件操作,于恒溫水浴鍋中加熱浸提,趁熱抽濾,濾渣再按原條件進行第2次乙醇浸提,趁熱抽濾,合并2次濾液。 將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行減壓濃縮至乙醇除盡,將濃縮液用配制好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的鹽酸溶液調(diào)至pH=3,用離心機(2 000 r/min,5 min)離心濃縮液,用布氏漏斗抽濾,作為樣品溶液備用。

　　2.2 大孔吸附樹脂分離純化

　　2.2.1 樹脂的預(yù)處理 D101樹脂用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇浸泡24 h,除去上層漂浮物,濕法裝柱,用乙醇流動清洗,應(yīng)不時檢查流出的乙醇液,至乙醇液與水混合(1∶5)不呈白色渾濁為止,然后用水沖洗至無醇味止。

　　2.2.2 丹參提取液分離純化 離心后的樣品溶液通過D 101大孔樹脂(藥材與樹脂用量比為1∶4;流速為2.0~3.0 BV/h),用水進行沖洗,除去水溶性雜質(zhì)。采用FeCl3檢測法,判斷洗脫液中有無丹酚酸B成分被洗脫,用水6倍量沖洗,繼用體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇7倍量洗脫(流速為0.5~1.0 BV/h) 。收集體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇洗脫液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(60 ℃)減壓濃縮,濃縮至液體相對密度為1.15。濃縮液噴霧干燥(進風(fēng)溫度220 ℃,出風(fēng)溫度80 ℃),最終得淡黃色固體粉末。置干燥器內(nèi),備用。

　　2.3 丹酚酸B含量測定

　　2.3.1 供試品溶液的制備 精密稱取丹參提取物粉末10 mg,加入100 mL量瓶中,加水溶解定容,搖勻,過0.45 μm 微孔濾膜,即得。

　　2.3.2 色譜條件 色譜柱: C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm); 流動相:甲醇?水?乙腈?甲酸(體積比30∶59∶10∶1);流速:1 mL·min-1;檢測波長:286 nm;進樣量:10 μL;柱溫:35 ℃;

　　2.3.3 含量測定方法[4] 精密量取供試品溶液10 μL,注入液相色譜儀中,按“2.3.2”項下條件操作,測定丹酚酸B吸收峰的峰面積積分值,計算丹酚酸B含量。

　　2.4 樣品的固形物含量

　　將洗脫液于60 ℃恒溫水浴,揮干乙醇和部分水分成稠膏狀,膏狀物移至真空干燥箱(60 ℃,0.09 MPa)減壓干燥,置干燥器0.5 h(防回潮),待樣品冷卻后,精密稱量。

　　3 結(jié) 果

　　丹酚酸提取工藝正交試驗結(jié)果見表2。將實驗數(shù)據(jù)進行多元回歸, 求得回歸方程Y=1961+2.0861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X22+0.0186X1X3,R2=0.954 5,F=6.150 1,方程顯著有效,并得到最佳工藝參數(shù)為:乙醇濃度為45%,提取2次,每次1 h,溫度為70 ℃。對最佳處方進行驗證,3批樣品丹酚酸B含量分別為:70.23%、69.04%、69.69%。

　　4 討 論

　　4.1 提取丹參藥材中水溶性成分丹酚酸B,大部分文獻采用水提醇沉法。本文采用乙醇浸提的方法提取,其目的是為了避免用水提取時提取液中含有糖類等水溶性雜質(zhì)而使液體黏稠。表2 U9(96)均勻設(shè)計表及試驗結(jié)果

　　4.2 丹酚酸B對熱不穩(wěn)定,易氧化水解,對受熱溫度和受熱時間敏感,所以丹參提取液不宜長時間高溫濃縮。試驗結(jié)果表明,丹酚酸提取宜采用減壓濃縮和噴霧干燥等工藝,降低工藝過程的溫度和受熱時間,有利于提取物中丹酚酸保存率的提高[4]。

　　4.3 將濃縮液pH值調(diào)至3,可以使部分雜質(zhì)析出,且酸性體系有利于丹酚酸B水溶液在受熱條件下的穩(wěn)定;同時調(diào)節(jié)溶液的pH可以改變丹酚酸在溶液中的游離狀態(tài),酸性條件下丹參酚酸的極性下降,有利于大孔吸附樹脂對丹酚酸的吸附。

　　4.4 以體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇濕法裝柱,清洗,然后用水沖洗,沖洗速度宜慢,使大孔樹脂堆實以利于吸附藥液;藥液通過D 101大孔樹脂,流速控制為樹脂體積2.0~3.0 BV/h,這樣可以使藥液與樹脂充分接觸,靜置一段時間再用水進行沖洗,洗脫糖等水溶性雜質(zhì),而丹酚酸B類成分未被洗脫。用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇洗脫,丹酚酸B具有良好的解吸附性。