農(nóng)藥已經(jīng)成為了中草藥中主要的外源性有害殘留物之一，帶來的潛在安全問題影響了中藥行業(yè)的持續(xù)發(fā)展。因此，加強(qiáng)中藥中農(nóng)藥多殘留的分析新技術(shù)研究對(duì)保證其質(zhì)量安全是非常必要的。本文將綜述各種分析方法在中藥材農(nóng)殘分析中的應(yīng)用現(xiàn)狀，對(duì)目前各種技術(shù)的關(guān)鍵步驟進(jìn)行總結(jié)、介紹和比較。

　　隨著農(nóng)藥殘留分析領(lǐng)域樣品前處理方法的逐漸成熟，農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法也多種多樣，目前較常用的方法主要為氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、毛細(xì)管電泳法、免疫分析法和生物傳感器技術(shù)等。

　　一、氣相色譜法

　　氣相色譜法(GC)是一種以氣體為流動(dòng)相的一種色譜分離分析方法。在中藥農(nóng)殘的分析中，氣相色譜法常與火焰離子化檢測(cè)器[1]、火焰光度檢測(cè)器(FPD)[2-3]、電子捕獲檢測(cè)器(ECD)[3-4]和質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)[3]聯(lián)用。Du J J等[1]將超聲波輔助提取與分散液液微萃取技術(shù)聯(lián)合用于樣品提取，采用氣相色譜-火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行樣品分析，建立了梨汁中氯氰菊酯、芐氯菊酯殘留的分析方法。鐘瑤等人[2]利用乙酸乙酯超聲輔助提取、石墨化炭黑凈化，GC-FPD法測(cè)定濕毒清片中的14種有機(jī)磷。

　　中醫(yī)藥評(píng)職知識(shí)：中藥學(xué)領(lǐng)域sci期刊有哪些

　　2020年中華人民共和國藥典(四部)[3]中農(nóng)藥殘留測(cè)定方法中，針對(duì)不同類型的農(nóng)藥共有五種檢測(cè)方法，五種檢測(cè)方法的共同缺陷均為所用到的試劑毒性較大且消耗較多，需要反復(fù)提取、凈化和濃縮;如第一法中采用二氯甲烷-丙酮-石油醚反復(fù)提取和凈化，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)兩次濃縮，結(jié)合GC-ECD方法測(cè)定植物性藥材和飲片9 種有機(jī)氯類農(nóng)藥，該方法的樣品前處理較復(fù)雜，且用到毒性較大的二氯甲烷，試劑消耗較多，但方法的靈敏度可以達(dá)到0.001mg/kg。葉江雷等人[4]采用分散固相萃取提取凈化、GC-ECD 測(cè)定個(gè)茶葉中六六六、敵敵涕、硫丹等茶葉中常見的20種農(nóng)藥殘留量，該方法的樣品提取無需濃縮，凈化液過膜后直接分析，可以在很大程度上節(jié)約處理時(shí)間，有一定的基質(zhì)干擾。

　　二、高效液相色譜法

　　高效液相色譜法在中藥制劑中農(nóng)藥多殘留的分析中占了非常重要的地位，常利用強(qiáng)大的色譜分離技術(shù)，與二極管陣列檢測(cè)器(DAD)[5]、熒光檢測(cè)器(FLD)[6]、質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)[7]等聯(lián)用。高效液相色譜法(HPLC)是一種以高壓輸出的液體為流動(dòng)相的色譜技術(shù)，具有高速、高效、高靈敏及自動(dòng)化等特點(diǎn)。藏利國[5]采用正己烷和丙酮混合溶劑提取銀杏葉中的氯氰菊醋農(nóng)藥殘留，氟羅里硅土/活性炭柱凈化，LC-DAD分析。吳定芳等人[6]乙腈提取，SPE-NH2固相萃取小柱凈化，柱后衍生，LC-FLD法分析19種氨基甲酸酯類農(nóng)藥。Jiachun Li等人[7]用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定三七止痛膠囊中的35種有機(jī)磷農(nóng)藥，采用分散固相萃取法凈化。

　　三、 高效毛細(xì)管電泳法

　　高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)是電泳與色譜相結(jié)合的一種現(xiàn)代色譜分離技術(shù)，原理是以毛細(xì)管為分離通道，高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依據(jù)樣品中的各種待測(cè)組分之間的淌度和分配行為上的差異而進(jìn)行分離的微型液相分離技術(shù)。在中藥農(nóng)殘中，通常會(huì)借助毛細(xì)管電泳法的分離技術(shù)與紫外檢測(cè)器(UV)、電導(dǎo)檢測(cè)器(ECD)與質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)[8-9]聯(lián)用。杜雪純等人[8]采用毛細(xì)管電泳質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，通過對(duì)緩沖溶液組成和質(zhì)譜條件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了多菌靈、多效唑等 19 種有機(jī)氮類農(nóng)藥的有效分離，最后成功地測(cè)定了白芍樣品中 19 種有機(jī)農(nóng)藥殘留。劉銀[9]采用環(huán)糊精毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定滅草唆、甲氧咪草煙、稀草酮和噸喘草銅對(duì)映體，該方法所需樣品用量少、運(yùn)行成本低、抗污染能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。

　　四、超臨界流體色譜法

　　超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體作為流動(dòng)相的色譜技術(shù)，其分離原理與 GC、LC 相似，根據(jù)樣品組分在流動(dòng)相和固定相間的分配系數(shù)不同而實(shí)現(xiàn)分離。因?yàn)槌�臨界流體具備高擴(kuò)散性、低粘度、溶解能力強(qiáng)等特點(diǎn)，使得超臨界流體色譜的分離效能優(yōu)于 GC、LC、SFC 在農(nóng)殘分析中與各種氣相和液相色譜檢測(cè)器以及與質(zhì)譜聯(lián)用，主要用于熱不穩(wěn)定、低揮發(fā)性以及難以用氣相和液相色譜分離分析的農(nóng)藥品種。Ishibashi M 等人以超臨界流體色譜串聯(lián)質(zhì)譜法為色譜分析手段，建立了糙米、洋蔥和菠菜中 17 種農(nóng)藥殘留的分析方法。

　　五、免疫分析法

　　免疫分析法(IA)是利用抗體可與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的這一特殊性質(zhì)，將抗體作為生物化學(xué)檢測(cè)器對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行定量和定性分析的一種技術(shù)。目前，用于農(nóng)藥分析的免疫分析方法主要是酶免疫分析法，其中酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的報(bào)道較多，楊熠等人[12]采用聚乙二醇-6000制備抗恩諾沙星卵黃抗體，間接競(jìng)爭酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)恩諾沙星。

　　六、 生物傳感器法

　　生物傳感器是用生物活性物質(zhì)(如酶、抗原)作為識(shí)別元件，對(duì)待測(cè)化合物具有高度選擇性的一種儀器分析新技術(shù)。與其他分析方法相比，生物傳感器具有不需要樣品前處理、特異性強(qiáng)、分析快速、操作簡單、價(jià)廉等特點(diǎn)。魏福祥等人采用乙酰膽堿酯酶生物傳感器方法測(cè)定蔬菜水果中對(duì)馬拉硫磷和甲基對(duì)硫磷，該方法與氣相色譜和液相色譜法進(jìn)行了對(duì)比，耗時(shí)較少，操作簡單。

　　各種分析方法在中藥農(nóng)藥殘留的對(duì)比

　　氣相色譜方法

　　氣相色譜方法是中藥農(nóng)殘中最常用的一種檢測(cè)方法，根據(jù)檢測(cè)器的不同可以特異性的檢測(cè)不同的對(duì)象、適用范圍廣、靈敏準(zhǔn)確;但該種方法的樣品前處理一般較復(fù)雜、試劑消耗多、儀器較昂貴，不適用揮發(fā)性低的農(nóng)殘的測(cè)定。

　　高效液相色譜法

　　高效液相色譜法在中藥農(nóng)殘的應(yīng)用僅次于氣相色譜法，適用于沸點(diǎn)高和對(duì)熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥，該種方法可以同時(shí)檢測(cè)526種農(nóng)藥殘留物，可以準(zhǔn)確定性和定量;但該種方法的樣品前處理法跟氣相色譜法一樣，同樣操作復(fù)雜、試劑消耗較多。

　　(三)其它四種分析方法

　　高效毛細(xì)管電泳法、超臨界流體色譜法、免疫分析法和生物傳感器法目前在中藥農(nóng)殘的應(yīng)用不如上述兩種方法廣泛，但這些方法具有所需樣品用量少、運(yùn)行成本低、耗時(shí)少、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。

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　　作者：鐘艷琴，蘇望寧，伍鳳祥